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DikmaPureHPLC離子對(duì)試劑的選擇和使用
  • 更新日期:2016-12-21     信息來(lái)源:本站      瀏覽次數(shù):2873
    • DikmaPureHPLC離子對(duì)試劑的種類和濃度對(duì)分離效果都有較大和影響。DikmaPureHPLC離子對(duì)試劑種類的選擇依賴于被分離樣品的性質(zhì)。被分離溶質(zhì)是強(qiáng)酸或強(qiáng)堿,離子對(duì)試劑可以是強(qiáng)酸或強(qiáng)堿,弱堿或強(qiáng)酸,弱酸,如被分離的溶質(zhì)是弱酸或弱堿,則選用的DikmaPureHPLC離子對(duì)試劑必須是強(qiáng)堿或強(qiáng)酸。對(duì)于溶質(zhì)結(jié)構(gòu)性質(zhì)相差較大的混合樣品,離子對(duì)試劑種類的選擇并沒(méi)有 特殊要求.離子對(duì)試劑疏水性的差別可以通過(guò)調(diào)節(jié)離子對(duì)試劑濃度和有機(jī)溶劑濃度獲得滿意的分離效果.
       
      DikmaPureHPLC離子對(duì)試劑的使用  
      “DikmaPureHPLC離子對(duì)試劑不一定是表面活性劑,如己烷和庚烷磺酸鈉,又如三乙胺活四丁基溴化胺,不具表面活性作用。所以用己烷和庚烷鹽就沒(méi)有泡末,用四丁基溴化胺也不產(chǎn)生氣泡。十二烷基磺酸鈉(或硫酸鈉),或者十六烷基溴化鈉(CTAB,一種做陰離子用的陽(yáng)性表面活性劑),在濃度高的時(shí)候容易產(chǎn)上泡末。做HPLC時(shí)流動(dòng)相里加的SDS或CTAB濃度一般不會(huì)太高,一般在0.1%以下,而且流動(dòng)相里有甲醇等有機(jī)溶劑,高濃度的有機(jī)溶劑有破乳的作用,因此,混合后的流動(dòng)相泡末應(yīng)該不會(huì)很多。另外,做電泳加入的SDS量很大的比如做蛋白質(zhì)SDS膠,或者毛細(xì)管電泳里的MECC,SDS濃度很高,而且沒(méi)有或者有很少比例的有機(jī)改性劑,當(dāng)然會(huì)有氣泡,跟HPLC不*相同。”
       
      使用DikmaPureHPLC離子對(duì)試劑時(shí),調(diào)節(jié)保留時(shí)間的方式與普通反相不同,變化有機(jī)相比例沒(méi)有改變PH值來(lái)得有效。 
      “當(dāng)流動(dòng)相PH值較高時(shí),樣品以中性形式存在,那么正電荷較少,相應(yīng)的保留較弱;當(dāng)流動(dòng)相PH值較低時(shí),樣品便以質(zhì)子堿H+形式的離子狀態(tài)存在,那么正電荷與固定相上帶負(fù)電荷的-SO3強(qiáng)烈吸附,相應(yīng)的保留會(huì)非常強(qiáng)。”  
      “再說(shuō)明一下B物質(zhì)的pKa,其值為10.5,在pH為4.5、3.8時(shí)都以離子態(tài)存在,這點(diǎn)沒(méi)錯(cuò),雖然都是離子態(tài),都是99%以上,但從量上說(shuō)還是有點(diǎn)不一樣的。任何物質(zhì)以離子態(tài)存在時(shí)都有一個(gè)平衡的狀態(tài):B+(H+)==(BH+),這里存在著一個(gè)平衡常數(shù)K(或者說(shuō)離解常數(shù)),于是pH不同時(shí),H+不同,對(duì)應(yīng)的B、BH+也不同。所以才會(huì)出現(xiàn)pH不同,保留值會(huì)不同。

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